Nuovi parametri strumentali

Nell’ambito della diagnostica differenziale delle anemie microcitiche la disponibilità nelle differenti tecnologie di parametri come il rapporto M/H (% emazie microciti che/% di emazie ipocromiche) (Figure 5-6), MAF (Fattore anemia microcitica), RBC-y (emazie ipocromiche), LHD (Densità emoglobina bassa), CHr e RetHE  (Concentrazione emoglobinica reticolocitaria), consente uno screening tra le anemie microcitiche ferro-carenziali e la talassemia minor (Figura 7).

Nell’ambito delle anemie emolitiche da alterazione della membrana eritrocitaria abbiamo a disposizione parametri come %Hyper (la percentuale di emazie ipercromiche) e MCVr (MCV rilevato nel canale di analisi dei reticolociti) utili per l’identificazione di sferociti. La presenza di una doppia popolazione eritrocitaria  (popolazione dimorfica) viene facilmente evidenziata dall’osservazione dell’isogramma di distribuzione dei volumi eritrocitari. Di grande rilevanza ai fini di uno screening immediato è la possibilità di avere in automazione la segnalazione e/o il conteggio sia di eritroblasti in circolo (Figura 8), che di frammenti di globuli rossi (Figura 9): in entrambi i casi, è necessaria, in caso di prima osservazione, una validazione qualitativa del dato al microscopio.

Nell’analisi strumentale quantitativa delle piastrine è molto importante l’identificazione di artefatti che possono causare pseudopiastrinopenie o pseudotrombocitosi, situazioni che determinano sul referto la presenza di allarmi specifici e/o anomalie della distribuzione dei volumi piastrinici negli istogrammi, facendo particolare attenzione alle situazioni di mancata separazione dal rumore di fondo ovvero dalla popolazione eritrocitaria (Figura 10). Il valore della dimensione delle piastrine (MPV) e il parametro IPF (frazione immatura delle piastrine) sono parametri molto utili per segnalare la presenza in circolo piastrine di grandi dimensioni, siano esse piastrine giganti ovvero piastrine immature e/o reticolate. Tutti i sistemi eseguono una doppia conta delle piastrine per fornire un valore accurato e preciso, molto utile nei casi di piastrinopenia vera. Il sistema CELL DYN Sapphire è in grado di fornire il conteggio delle piastrine utilizzando tre differenti metodi: ottico, impedenziometrico e citofluorimetrico utilizzando come marcatore il CD61 (Figura 11).

Per quanto riguarda i globuli bianchi, gli strumenti automatici sono in grado di contare e classificare i leucociti normali presenti nel sangue periferico con buona precisione e accuratezza, sia negli intervalli di riferimento, sia in presenza di anomalie distributive a carico di una o più categorie. In questo primo compito le macchine si sostituiscono all’uomo nella gestione di quella parte dell’attività analitica costituita dalla valutazione quantitativa. Gli strumenti ematologici automatici sono considerevolmente più precisi rispetto al metodo microscopico, grazie al numero elevato, pari a diverse migliaia, di cellule che vengono analizzate in sospensione, senza irregolarità distributive, mediante misurazioni obiettive e standardizzate. Questa migliorata precisione trova importanti applicazioni soprattutto in presenza di gradi spiccati di leucopenia, con vantaggi immediati nel controllo longitudinale ematologico dei pazienti sottoposti a terapie mieloablative. Con gli strumenti odierni abbiamo avuto modo di migliorare in misura significativa e con implicazioni cliniche immediate l’aspetto più debole della formula leucocitaria tradizionale, quello quantitativo, rendendo possibile la gestione in automazione di campioni altamente citopenici, ma qualitativamente normali, grazie alla grande precisione delle conte assolute di singole classi cellulari. Anche in presenza di alterazioni quantitative di una o più popolazioni leucocitarie con normale morfologia, la gestione in automazione consente una refertazione accurata e precisa. L’accuratezza analitica degli strumenti più evoluti è molto elevata per neutrofili, linfociti ed eosinofili; le maggiori discrepanze riguardano il conteggio dei monociti, fortemente dipendente dalla metodologia analitica, e quello dei basofili, a causa della frequenza molto bassa di questa classe di leucociti.  Un aspetto fondamentale della formula leucocitaria eseguita in automazione è rappresentato dalla segnalazione di cellule atipiche e/o immature, consentendo di identificare e selezionare, attraverso segnali specifici, quei campioni che richiedono una revisione microscopica. Nelle Figure 12-15 sono riportati quattro referti strumentali di leucemie acute analizzate con differenti tecnologie: in tutti i casi sono evidenti le segnalazioni strumentali per presenza di cellule immature e/o blasti.

Le popolazioni cellulari atipiche vengono caratterizzate in modo alternativo e complementare rispetto alla morfologia e alla citochimica convenzionali: fondamentali a questo proposito sono le distribuzioni grafiche monodimensionali (istogrammi) o bidimensionali (citogrammi) con cui gli strumenti rappresentano le distribuzioni delle diverse classi cellulari separate in funzione delle specifiche proprietà che ciascuna metodologia analizza. Inoltre, per alcune categorie cellulari, come quella dei precursori della serie granulocitica e/o quella dei blasti, sono stati sviluppate da alcune tecnologie metodiche per la determinazione quantitative di queste cellule, quando presenti nel campione di sangue periferico. Anche nell’analisi strumentale dei leucociti, è fondamentale individuare quei campioni con pseudoleucocitosi, artefatto in genere causato dalla presenza di particelle di dimensioni tali da entrare nell’intervallo volumetrico del conteggio leucocitario, o con pseudoleucopenia, artefatto in cui la conta leucocitaria è falsamente diminuita per sottrazione di una quota dei leucociti circolanti al conteggio, in genere per agglutinazione leucocitaria e/o leucopiastrinica. Si segnala infine la possibilità di avere oggi anche le percentuali delle sottopopolazioni linfocitarie circolanti (CD3, CD4 e CD8) e il rapporto CD4/CD8 nel referto di sangue periferico, utilizzando la tecnologia Abbott (Figura 16).

 

 
 

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